离子交换层析根据化合物的净电荷进行分离。带负电荷或 正电荷的官能团共价结合于固相载体基质,分别成为阳离子交 换剂和阴离子交换剂。当一个带电荷的分子加入到带有相反电 荷的交换剂时,它就会被吸附,同时,带相同电荷的离子和中 性分子则被洗脱到层析柱的外水体积里。带电荷分子的结合是 可逆的,通常可用盐或pH 梯度洗脱被吸附的分子。我们提供多 种不同颗粒大小、离子形式和纯度范围的离子交换介质。
等电点— 根据待分离化合物的特性选择离子交换载体。对于两性化合物来说,分子的等电点(pI)和它在不同pH 值下的稳定性决定了分离策略。pH 高于pI ,目标化合物将带负电荷,而当pH 低于pI 时,化合物则带正电荷。 因此,如果化合物在高于pI 的pH 下稳定,应该使用阴离子交换载体。相反,如果化合物在低于pI 的条件下稳定, 则应该使用阳离子交换载体。工作pH 值也决定了所要使用的交换剂的类型。一个强离子交换载体在很大的pH 跨 度范围内仍能维持其功能,而弱离子交换载体当pH 值与其官能团的pKa 差距较大时就会失去功能。
离子形式— 许多离子交换介质具有多种离子形式,而且可以从一种转变成另一种。载体的离子形式是指目前被树 脂官能团吸附的反荷离子。每种载体对不同反荷离子均有着的选择度。载体对反荷离子的选择度越低,与另一 个带相同电荷的离子的交换就越容易。因此,适当的离子形式将取决于被吸收样品离子的相对选择度。一般来说, 该离子形式对于官能团的选择度应该较样品离子低,这样样品离子才能将反荷离子置换从而被载体吸附。可以通过 加入第二种对载体具有更高选择度的反荷离子来洗脱样品离子。
孔性— 一种载体的孔性是指载体基质内的总的孔容量。孔容量越大,孔性越高。一个孔性很高的载体可能有很多 小孔或只有几个大孔。载体的排阻由条件下可通过孔的大分子决定。排阻高的多孔介质推荐用于分 离大分子量的分子,如蛋白、抗体和其他生物分子。排阻低的低孔性或高孔性介质推荐用于分离小分子量的分子, 如无机离子和有机酸等。高孔性介质包括Macro–Prep, Bio–Gel, 和Bio–Rex 70。低孔性介质包括AG 和Chelex 树 脂。
颗粒大小— 颗粒的大小以微米计,有干胶颗粒度或湿胶颗粒度两种命名方式。由于不同离子形式的树脂颗粒的水合 状况存在差异,其湿颗粒直径也会有所不同。较小的颗粒能提供更高的分辨率,但通常要求较低的工作流速;较大的 颗粒可获得的分辨率较低,但能在较高流速下运行。
离子交换层析可以有多种应用,包括分离和纯化生物分子,分离无机离子,试剂和水的去离子化,盐转换以及 去除金属离子、溴化乙锭和SDS。